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DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，DiO被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的 FITC滤光片检测。
DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，标记脂蛋白等。下面和NG体育小编一起来看看一种细胞膜绿色荧光探针的操作步骤：
染色液制备：
配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注意：未使用的储存液保存在-20℃，分装保存，避免反复冻融。
工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注意：工作液最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可从推荐浓度的十倍以上找最佳条件。
悬浮细胞染色：
悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。
在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
粘壁细胞的染色：
使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
显微镜检测：
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择。
多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定： 
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
流式细胞仪检测：
染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。