SOSG检测溶液和植物组织中的单线态氧
作者: 发布时间:2022-08-08 09:52:49
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SOSG证实能用来检测溶液和植物组织中的单线态氧(1O2)。
活性氧引起的许多生理损伤都可能归因于单线态氧(1O2),包括与脱氧鸟苷选择性反应形成8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的核酸修饰。单线态氧的寿命足够长(水中有4.4μs)使其能够充分扩散进入细胞和组织。单线态氧通过在1270nm处具弱化学发光的**特征直接被检测。实验室中通常用三种之一的方法来生成单线态氧:
①使用感光染料对二氧(3O2)进行光化学反应来制备;
②通过对一种过氧化物或二氧环丁烷进行加热分解制备;
③氧气流内通过微波放电来制备。
SOSG高度选择性结合单线态氧(1O2)。不像其他的荧光和化学发光的单线态氧检测试剂,SOSG与其他活性氧物质(ROS),包括羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(·O2–)和一氧化氮(NO)无可见反应【见图1】。
A)用荧光光度计(Ex/Em= 488/525nm)测定溶液内的荧光,溶液内含SOSG(1μM)和亚甲基蓝(10μM)溶于100mMpH 7.5 Tris Buffer;单线态氧清除剂叠氮钠(NaN3,1 mM);或50%D2O(重水,能够延长1O2的寿命)。每20s完成一次荧光测定,每次测定间隔30s(如灰条标示)。在这30s的间隔中,样本暴露于激光辐射(630–680 nm,<5 mW),导致亚甲基蓝光敏生成1O2。
B)用荧光光度计(Ex/Em=488/525nm)测定溶液内的荧光,溶液为50mM pH 7 Tris buffer,1mM黄嘌呤,SOSG(1μM),或含SOSG(1μM),或含二氢罗丹明123。约20s之后,加入50 mU/mL黄嘌呤氧化酶(XO)。XO催化黄嘌呤的氧化,产生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬间被H2O2降解。
荧光特征:
SOSG与单线态氧(1O2)反应前,探针最初发弱蓝色荧光,激发峰在372nm和393nm,发射峰在395nm和416nm。当含单线态氧(1O2),探针发射绿色荧光,光谱特征类似于荧光素(**激发/发射波长约504/525nm)。
线性化关系:
SOSG的荧光产物在某些溶液中随着时间被降解,且在不含单线态氧的碱性pH溶液中,SOSG会发荧光。不过,当进行适当的操作,绿色荧光信号的强度与单线态氧(1O2)含量相关,且不会受其他ROS的明显干扰。
使用方法:
1.SOSG储存液制备:收到货按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇来制备储存液,每100μg粉末加入33μL甲醇制备~5mM储存液。正式实验前制备工作液,不能用完的工作液需丢弃,不可保存后再用。
2.溶液检测:SOSG不具细胞膜渗透性,设计用来检测溶液环境内的单线态氧。**的稀释缓冲液和工作浓度需根据经验来调整。建议起始工作浓度为1-10μM。
保存:-20℃避光干燥保存,**期至少6个月
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FITC-介孔二氧化硅20-30nm 5mg/ml 1ml
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